Переосаждение и очистка ДНК
Чистота и гомогенность матрицы - необходимое условие хорошего и длинного сиквенса. Обязательно проведите гель-электрофорез вашей матрицы, чтобы убедиться в её наличии, качестве и концентрации. Если на электрофорезе видны побочные продукты, необходимо выделить и очистить целевой продукт.
Кроме этого, перед тем, как отдать образец на секвенирование, необходимо полностью избавиться от остатков праймеров, в противном случае возможно появление дополнительных продуктов в процессе подготовки к сиквенсу.
Возможно использование коммерческих наборов для очистки, однако мы рекомендуем переосаждение в мягких условиях для очистки от праймеров и других компонентов ПЦР-реакции (скачать протокол).
ВНИМАНИЕ! На эффективность переосаждения сильно влияют температура и концентрация этанола в смеси. Следует избегать жестких условий (низкой температуры и высокой концентрации этанола), поскольку наряду с матрицей в пробе могут остатья праймеры.